Aislamiento de péptidos inhibidores de bacterias a partir de bacterias ácido lácticas del tracto digestivo del lechón e identificación mediante prueba proteómica
DOI:
https://doi.org/10.17268/sci.agropecu.2017.04.15Palavras-chave:
bacteriocina, proteómica, antagonismos, BAL, bacterias nativas.Resumo
En la alimentación porcina se usan antibióticos los cuales son un riesgo latente para la salud animal y pública. Los microorganismos son adquiridos del entorno durante las diferentes etapas de su vida, algunas bacterias que colonizan y logran ser parte de la flora natural digestiva ejercen acción antibiótica (sustancias extracelulares llamadas bacteriocinas), las cuales se obtuvieron de sustancias extracelulares de ocho bacterias ácido lácticas (BAL) nativas aisladas de dos lechones (Sus scrofa domesticus); las BAL se identificaron mediante pruebas bioquímicas y pruebas de antagonismo frente a Escherichia fergunsonii y Shigella sannei. La identificación molecular de las bacterias y la sustancia proteica se realizó mediante proteómica, por el método Q proteome™ (método de extracción de la proteína directamente del cultivo de bacterias) donde inicialmente se realizó la digestión bacteriana con el Kit, los productos se sometieron a migraciones, en el gel de policrilamida, seleccionando aquellas de 5 a 2500 KD cortados del gel y una segunda digestión con método convencional con tripsina. Los productos fueron analizados mediante espectrometría de masas en Maldi TOF TOF, obteniendo fragmentos de péptidos que fueron comparados molecularmente a organismo pertenecientes al género Bacillus y luego con Lactobacillus, donde se encontró dos péptidos, llamado ornithine monooxygenase (Bacillus firmus) y RNase J family beta-CASP ribonuclease (Lactobacillus saerimneri) péptidos que tienen efecto inhibidor de bacterias, antimicrobiano que pueden ser bacteriocinas.Referências
Bhandari, S.K.; Opapeju, F.O.; Krause, D.O.; Nyachoti, C.M. 2010. Dietary protein level and probiotic supplementation effects on piglet response to Escherichia coli K88 challenge: Performance and gut microbial population. Livestock Science 133, no. 11th International Symposium on Digestive Physiology of Pigs, Part 1: 185-188.
Cechova, D.; Novakova, k.; Mikulik k.; M.; Novotna, O.; Julak, J.; Zanvit, P.; Prokesova, L. 2013. Immuno-modulatory properties of subcellular fractions of a G+ bacterium, Bacillus firmus. Folia Microbiologica 58(2): 111-21.
Cueto-Vigil, M.C.; Acuña-Monsalve, Y.; Valenzuela-Riaño, J. 2010. Evaluación in vitro del potencial probiótico de bacterias ácido-lácticas aisladas de suero costeño. Actualidades Biológicas 32(93): 129-138.
Dulanto, G.R. 2013. Identificación rápida de especies del género Vibrio asociados con el cultivo de "langostino blanco" Litopenaeus vannamei por amplified ribosomal DNA restriction analysis (ARDRA).
Del Coco, V.F. 2000. Los microorganismos desde una perspectiva de los beneficios para la salud. Revista Argentina de Microbiología 47: 171.
García, M.; López, Y.; Carcasses A. 2012. Empleo De Probióticos En Los Animales. Facultad de Medicina Veterinária, Univ. Popular de Angola. Empresa del Arroz, Vertientes. Disponible en http://www.engormix.com/ganaderia-carne/articulos/empleo-probioticos-animales-t29474.htm
Geng, C.; Nie, X.; Tang, Z.; Zhang, Y.; Lin, J.; Sun, M.; Peng, D. 2016. A novel serine protease, Sep1, from Bacillus firmus DS-1 has nematicidal activity and degrades multiple intestinal-associated nematode proteins.Scientific Reports 6: 25012.
Gustincich, S.; Manfiolett, G.; Del Sal, G.; Schneider, C.; Carnici, P. 1991. A fast method for high quality genomic DNA extraction from whole human blood. Biotechniques 11(3): 298-302.
Kim, H. B.; Borewicz, K.; White, B. A.; Singer, R. S.; Sreevatsan, S.; Tu, Z. J.; Isaacson, R. E. 2012. Microbial shifts in the swine distal gut in response to the treatment with antimicrobial growth promoter, tylosin.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 109(38): 15485–15490.
Luque, J.; Herraez, A. 2006. Biología molecular e ingeniería genética, conceptos, técnicas y aplicaciones en la salud, departamento de bioquímica y biología molecular, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares Madrid. Editorial Harcourt. Grafica Muriel S.A.
Macouzet, M., Robert, N.; Lee, B.H. 2010. Genetic and functional aspects of linoleate isomerase in Lactobacillus acidophilus. Applied microbiology and biotechnology 87(5): 1737-1742.
National Center for Biotechnology Information. 2015. Database resources of National Center for Biotechnology Information. Nucleic Acids Research, 43(Database issue): D6-D17.
Ramírez, L.; Castaño, D. 2009. Metodologías para evaluar in vitro la actividad antibacteriana de compuestos de origen vegetal. Scientia et Technica 42: 263-268.
Romero, E.; Fedkenheuer, M.; Chocklett, S.W.; Qi, J.; Oppenheimer, M.; Sobrado P. 2012. Dual role of NADP (H) in the reaction of a flavin dependent N-hydroxylating monooxygenase. Contents lists available at SciVerse Science Direc, Biochimica et Biophysica Acta 1824: 850-857.
Sánchez, H.; Ochoa, G. 2016. Producción y valoración de alimentos para animales monogástricos, con ensilado biológico de restos del procesamiento de langostino (Litopenaeus vannamei) fermentados con lactobacilos. Scientia Agropecuaria 7: 181-187.
Shirey, C.; Badieyan, S.; Sobrado, P. 2013. Role of Ser-257 in the Sliding Mechanism of NADP(H) in the Reaction Catalyzed by the Aspergillus fumi-gatus Flavin-dependent Ornithine N5-Monooxygenase SidA. The Journal of Biological Chemistry 288(45): 32440–32448.
Taweechotipatr, M.; Iyer, C.; Spinler, J. K., Versalovic, J.; Tumwasorn, S. 2009. Lactobacillus saerimneri and Lactobacillus ruminis: novel human-derived probiotic strains with immunomodulatory activities. FEMS Microbiology Letters 293(1): 65–72.
Torres, C; Zarazaga, M. 2002. Antibióticos como promotores del crecimiento en animales. ¿Vamos por el buen camino?. Logroño, Gaceta Sanitaria 16(2): 109-112.
Vélez, J. 2014. Evaluación de la actividad antimicrobiana de bacterias probióticas extraídas del calostro de cerdas de granjas del Aburrá sur, Tesis de magister en biotecnología, aislamiento de cepas nativas de pro-bióticos para su uso en animales, Producción, desarrollo y transformación de productos agropecuarios, Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Escuela de Biociencias, Medellín, Colombia.
Xue-Yuan, P.; Bralley, P.; Jones, G.H.; Luisi, B.F. 2015. Linkage of catalysis and 5′ end recognition in ribonuclease RNase J. Nucleic Acids Research 43(16): 8066-8076.
Yimin, C.; Yoshimi, B.; Takashi, N.; Tae-Kwang, O. 1998. Specific probiotic characterization of Weissella hellenica DS-12 isolated from flounder intestine. The Journal of general and applied microbiology 44(5): 311-316.
Zohra, R.R.; Shah Ali, U.Q.; Sidra P.; Afsheen A. 2016. Influence of different metals on the activation and inhibition of α-amylase from thermophilic Bacillus firmus KIBGE-B28. Pakistan Journal of Pharma-ceutical Sciences 29(4): 1275-1278.
Received March 29, 2017.
Accepted November 26, 2017.
Corresponding author: hsanchezs@untumbes.edu.pe (H. Sánchez).
Downloads
Publicado
Como Citar
Edição
Seção
Licença
Los autores que publican en esta revista aceptan los siguientes términos:
a. Los autores conservan los derechos de autor y conceden a la revista el derecho publicación, simultáneamente licenciada bajo una licencia de Creative Commons que permite a otros compartir el trabajo, pero citando la publicación inicial en esta revista.
b. Los autores pueden celebrar acuerdos contractuales adicionales separados para la distribución no exclusiva de la versión publicada de la obra de la revista (por ejemplo, publicarla en un repositorio institucional o publicarla en un libro), pero citando la publicación inicial en esta revista.
c. Se permite y anima a los autores a publicar su trabajo en línea (por ejemplo, en repositorios institucionales o en su sitio web) antes y durante el proceso de presentación, ya que puede conducir a intercambios productivos, así como una mayor citación del trabajo publicado (ver efecto del acceso abierto).
