Detección y enumeración de Salmonella sp. en carne de llama (Llama glama) mediante qPCR
DOI:
https://doi.org/10.17268/sci.agropecu.2019.03.11Palabras clave:
Salmonella sp., qPCR, llama, RapID ONE.Resumen
Esta investigación plantea una metodología para detectar y cuantificar en tiempo real la presencia de Salmonella sp. en carne de llama (Llama glama) empleando qPCR, el método se validó a través del recuento en placa. El método consistió en detectar la presencia o ausencia de Salmonella sp. en muestras de carnes de llama, los resultados positivos se identificaron mediante el sistema bioquímico acelerado RapID ONE, finalmente los resultados de la identificación se confirmaron por medio de la PCR en tiempo real, empleando un cebador delantero e inverso del gen invA, al igual que una sonda fluorescente anclada a un fragmento del gen invA. Finalmente, se cuantificaron 17 muestras de carne de llama, resultando que el 53,13% de las muestras estaba contaminado por Salmonella sp.
Biografía del autor/a
Miguel Gómez-Castillo, Facultad de Industrias Alimentarias de la Universidad Nacional Agraria La Molina.
Marcial Silva-Jaimes, Departamento de Ingeniería de Alimentos y Productos Agropecuarios, Facultad de Industrias Alimentarias de la Universidad Nacional Agraria La Molina.
Bettit Salvá-Ruíz, Departamento de Tecnología de Alimentos y Productos Agropecuarios, Facultad de Industrias Alimentarias de la Universidad Nacional Agraria La Molina.
Carlos Elías-Peñafiel, Departamento de Ingeniería de Alimentos y Productos Agropecuarios, Facultad de Industrias Alimentarias de la Universidad Nacional Agraria La Molina.
Citas
Achtman, M.; Wain, J.; Weill, F.-X.; Nair, S.; Zhou, Z.; Sangal, V.; Krauland, M.G.; Hale, J.L.; Harbottle, H.; Uesbeck, A.; Dougan, G.; Harrison, L.H.; Brisse, S.; the S. enterica MLST study group. 2012. Multilocus Sequence Typing as a Replacement for Serotyping in Salmonella enterica. PLOS Pathogens 8(6): 1-19.
Ayala, C. 1999. Estudio Detallado de la Ocurrencia de Sarcocystis en el altiplano boliviano. En: Progress in South American Camelids research, The European Association for Animal Production. Gottingen, Ger-many. P. 181-185.
Bell, R.L; Jarvis, K.G.; Ottesen, A.R.; McFarland, M.A.; Brown, E.W. 2016. Recent and emerging innovations in Salmonella detection: A food and environmental perspective. Microb Biotechnol 9(3): 279–92.
Campero, J. 2005. Lama (Lama glama) and guanaco (Lama guanicoe): general perspective. Proc ICAR/FAO Seminar ICAR. Technical Series 11: 11-18.
Chen, Z.; Biswas, S.; Aminabadi, P.; Stackhouse, J.W.; Jay‐Russell, M.T.; Pandey, P.K. 2019. Prevalence of Escherichia coli O157 and Salmonella spp. in solid bovine manure in California using real‐time quantitative PCR. Letters in Applied Microbiology 69(1): 23-29.
Cristofanelli, S.; Antonini, A.; Torres, D.; Polidori, P.; Renieri, C. 2005. Carcass characteristics of Peruvian llama (Lama glama) and alpaca (Lama pacos) reared in the Andean highlands. Small Rum Res 58: 219-222.
Crump, J.A. 2016. Salmonella infections (including enteric fever). En: Goldman L, Schafer AI, editores. Goldman-Cecil Medicine. 25a Edición. Filadelfia: 1971-1975.
Daum, L.T.; Barnes, W.J.; McAvin, J.C.; Neidert, M.S.; Cooper, L.A.; Huff, W.B.; Gaul, L.; Riggins, W.S.; Morris, S.; Salmen, A.; Lohman, K.L. 2002. Real-time PCR detection of salmonella in suspect foods from a gastro-enteritis outbreak in kerr county, Texas. J. of clinical microbiology 40(8): 3050-2.
FAO. 2005. Situación actual de los camélidos sudamericanos en Perú. Proyecto de Cooperación Técnica en apoyo a la crianza y aprovechamiento de los Camélidos Sudamericanos en la Región Andina TCP/RLA/2914. Disponible en: http://tarwi.lamolina.edu.pe/~emellisho/zootecnia_archivos/situacion%20alpcas%20peru.pdf.
FDA/CFSAN. 2001. Bacteriological Analytical Manual online. Disponible en:http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm2006949.htm
Gand, M.; Mattheus, W.; Saltykova, A.; Roosens, N.; Dierick, K.; Marchal, K.; De Keersmae-cker, S.C.J.; Bertrand, S. 2019. Development of a real-time PCR method for the genosero-typing of Salmonella Paratyphi B variant Java. Applied Microbiology and Biotechnology 103(12): 4987-4996.
Grimont, P.; Weill, F-X. 2007. Antigenic Formulae of the Salmonella serovars, (9th ed.) Paris: WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella. Institute Pasteur: 1-166.
Godoy, R. 2006. Saneamiento y detoxificación de carne de llama (Lama glama) con Sarcocystis aucheniae mediante cocción, horneado, fritura y congelado. Tesis para optar el título profesional de médico veterinario. E.A.P de Medicina Veterinaria. Facultad de Medicina Veterinaria. Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Kasturi, K.N.; Drgon, T. 2017. Real-time PCR method for detection of Salmonella spp. in environmental samples. Appl Environ Microbiol 83(14): 1-12.
Keer, J.T. 2008. Quantitative Real-time PCR Analysis. Chapter 7. Essentials of Nucleic Acid Analysis: A Robust Approach. 132-166.
Langridge, G.C.; Wain, J.; Nair, S. 2012. Invasive Salmonellosis in Humans. EcoSal Plus 5(1): 1-14.
Lopes, A.T.; Albuquerque, G.R.; Maciel, B.M. 2018. Multiplex Real-Time Polymerase Chain Reaction for Simultaneous Quantification of Salmonella spp., Escherichia coli, and Staphylococcus aureus in Different Food Matrices: Advantages and Disadvantages. BioMed research international: 1-12.
Malorny, B.; Löfström, C.; Wagner, M.; Krämer, N.; Hoorfar, J. 2008. Enumeration of salmonella bacteria in food and feed samples by real-time PCR for quantitative microbial risk assessment. Applied and environmental microbiology 74(5): 1299-304.
Mamani-Linares, L.W.; Cayo, F.; Gallo, C.B. 2013. Calidad tecnológica de doce músculos de llama jóvenes (Lama glama) bajo un sistema de crianza extensiva. Rev Inv Vet Perú 24: 168-175.
Mamani-Linares, L.W.; Cayo, F.; Gallo, C. 2014. Características de canal, calidad de carne y composición química de carne de llama: una revisión. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú 25(2): 123-150.
Nurjayadi, M.; Pertiwi, Y.P.; Islami, N.; Azizah, N.; Efrianti, U.R.; Saamia, V.; Wiranatha, I.M.; Nastassya, L.; El-Enshasye, H.A. 2019. Detection of the Salmonella typhi bacteria in contaminated egg using real-time PCR to develop rapid detection of food poisoning bacteria. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology 20: 1-7.
Parra, V.; Rondón, C. 2018. Factores relacionados con salmonelosis invasiva en un hospital de lima- Perú entre 2013-2017. Tesis de Bachiller en Medicina. Universidad Peruana Cayetano Heredia. Lima. Perú. 25 pp.
Pavic, A.; Groves, P.J.; Bailey, G.; Cox, J.M. 2010. A validated miniaturized MPN method, based on ISO 6579:2002, for the enumeration of Salmonella from poultry matrices. Journal of Applied Microbiology 109(1): 25-34.
Pérez, P.; Maino, M.; Guzman, R.; Vaquero, C.; Kobrich, C.; Pokniak, J. 2000. Carcass characteristics of llamas (Lama glama) reared in central Chile. Small Rum Res 37: 93-97.
Polidori, P.; Renieri, C.; Antonini, M.; Passamonti, P.; Pucciarelli, F. 2007. Meat fatty acid composition of llama (Lama glama) reared in the Andean highlands. Meat Sci 75: 356-358.
Prasertsee, T.; Chokesajjawatee, N.; Santiyanont, P.; Chuammitri, P.; Deeudom, M.; Tadee, P.; Patchanee, P. 2019. Quantification and rep‐PCR characterization of Salmonella spp. in retail meats and hospital patients in Northern Thailand. Zoonoses and Public Health 66(3): 301-309.
Resendiz-Nava, C.; Esquivel-Hernandez, Y.; Alcaraz-Gonzalez, A.; Castaneda-Serrano, P.; Nava, G.M. 2019. PCR Assays Based on invA Gene Amplification are not Reliable for Salmonella Detection. Jundishapur Journal of Microbiology 12 (2): e68764.
Riyaz-Ul-Hassan, S.; Verma, V.; Qazi, G.N. 2013. Real-time PCR-based rapid and culture-independent detection of Salmonella in dairy milk - addressing some core issues. Letters in Applied Microbiology 56(4): 275-282.
Siala, M.; Barbana, A.; Smaoui, S.; Hachicha, S.; Marouane, C.; Kammoun, S.; Gdoura, R.; Messadi-Akrout, F. 2017. Screening and detecting Salmonella in different food matrices in Southern Tunisia using a combined enrichment/real-time PCR method: correlation with conventional culture method. Frontiers in microbiology 8: 1-10.
Silva, C.; Betancor, L.; García, C.; Astocondor, L.; Hinostroza, N.; Bisio, J.; Rivera, J.; Perez-gasga, L.; Escanda, V.P.; Yim, L.; Jacobs, J.; Chabalgoity, J.A.; Portillo, F.G.; Puente, J.L. 2017. Characterization of Salmo-nella enterica isolates causing bacteremia in Lima, Peru, using multiple typing methods. PLoS ONE 12(12): e0189946.
Soto, M.G. Enfermedades Transmitidas por Alimentos, una importante causa de morbilidad en nuestro País. Lima: Ministerio de Salud, Dirección General de Epidemiología; 2012. 2 p. Reporte No.: 50.
Sumar, J. 2010. Nutrition in camelids. In: Wittwer, F.; Chihuailaf, R.; Contreras, H.; Gallo, C.; Kruze, J., Lanuza, F., Letelier, C., Monti, G., Noro, M. (ed). Updates on ruminant production and medicine. XXVI World Buiatric Congress, Santiago, Chile. Pp 343-357.
Tellez, J. 1992. Tecnología e industrias cárnicas. 1ª ed. Tomo II. P. 360-376, 460-468. Ed. Acribia. Zaragoza
Templar, A.; Schofield, D.M.; Nesbeth, D.N. 2017. Measuring E. coli and bacteriophage DNA in cell sonicates to evaluate the CAL1 reaction as a synthetic biology standard for qPCR. Biomolecular detection and quantification 11: 21-30.
Vinayaka, A.C.; Ngo, T.A.; Kant, K.; Engelsmann, P.; Dave, V.P.; Shahbazi, M-A.; Wolff, A; Bang, D.D. 2019. Rapid detection of Salmonella enterica in food samples by a novel approach with combination of sample concentration and direct PCR. Biosensors and Bioelectronics 129: 224-230.
Zhai, L.; Li, J.; Tao, T.; Lu, Z.; Lv, F.; Bie, X. 2019. Propidium monoazide real-time PCR amplifycation for viable Salmonella species and Salmonella Heidelberg in pork. Canadian Journal of Microbiology 65(7): 477-485.
Zhou, B.; Liang, T.; Zhan, Z.; Liu, R.; Li, F.; Xu, H. 2017. Rapid and simultaneous quantification of viable Escherichia coli O157:H7 and Salmonella spp. in milk through multiplex real-time PCR. Journal of Dairy Science 100(11): 8804-8813.
Received March 26, 2019.
Accepted September 1, 2019.
Corresponding author: gomez_917@hotmail.com (M.A. Gómez-Castillo).
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Los autores que publican en esta revista aceptan los siguientes términos:
a. Los autores conservan los derechos de autor y conceden a la revista el derecho publicación, simultáneamente licenciada bajo una licencia de Creative Commons que permite a otros compartir el trabajo, pero citando la publicación inicial en esta revista.
b. Los autores pueden celebrar acuerdos contractuales adicionales separados para la distribución no exclusiva de la versión publicada de la obra de la revista (por ejemplo, publicarla en un repositorio institucional o publicarla en un libro), pero citando la publicación inicial en esta revista.
c. Se permite y anima a los autores a publicar su trabajo en línea (por ejemplo, en repositorios institucionales o en su sitio web) antes y durante el proceso de presentación, ya que puede conducir a intercambios productivos, así como una mayor citación del trabajo publicado (ver efecto del acceso abierto).
