Protocolo celular para ensayos in vitro utilizando cepas atenuadas de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139
Resumo
Se propone un protocolo celular para determinar la capacidad de movilidad y de la invasión bacteriana intracelular de cepas vivas atenuadas en su virulencia, construidas a partir de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139 portadora de plásmido (S. enteritidis 82139). Las cepas obtenidas fueron: cepas simples mutantes: 82139 C, 82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI. y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresión de dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Se usó el Diseño Factorial para seleccionar y construir las cepas mutantes así como para determinar la Diferencia Mínima Significativa de la función génica de dsbA, dle y dlp en la movilidad y de capacidad de invasión bacteriana. La prueba de movilidad fue realizada en agar y leídas durante 36 horas. La prueba de invasión bacteriana fue determinada a 1, 2 y 4 horas de interacción bacteria–célula huésped. Se determinó que la proteína DsbA presenta una función determinante en la capacidad de movilidad y en la invasión bacteriana. En ambas funciones se presenta una función complementaria de Dlp a DsbA. Dle tendría una función TDOR específica y limitada, asociada con la biosíntesis de fimbrias SEF y posiblemente de algunas proteínas de virulencia. Dle no tiene efecto en la movilidad. La cepa doble mutante 82139 2C carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos genéticos para ser usados como nuevas cepas vacunales de tipo vivas y atenuadas en su virulencia debido a que los genes mencionados codifican las proteínas TDOR: DsbA, Dlp y Dle, encargadas de inducir el correcto plegamiento y/o transporte de proteínas de virulencia, fimbrias y flagelos para el correspondiente ensamblaje, translocación y/o inserción de invasinas, adhesinas y flagelinas, respectivamente.
Palabras Clave: Proteínas TDOR DsbA, Dlp y Del, Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139.Referências
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