Protocolo celular para ensayos in vitro utilizando cepas atenuadas de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139

Autores

  • Liliana Villanueva Universidad Nacional de Trujillo
  • Rafael Rotger
  • Raúl Beltrán

Resumo

Se propone un protocolo celular para determinar la  capacidad de movilidad y de la invasión bacteriana intracelular de cepas vivas atenuadas en su virulencia, construidas a partir de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139 portadora de plásmido (S. enteritidis 82139). Las cepas obtenidas fueron: cepas simples mutantes: 82139 C,  82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI. y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresión de dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Se usó el Diseño Factorial para seleccionar y construir las cepas mutantes así como para determinar la Diferencia Mínima Significativa de la función génica de dsbA, dle y dlp en la  movilidad  y de capacidad de invasión bacteriana. La prueba de movilidad fue realizada en agar y leídas durante 36 horas.  La prueba de invasión bacteriana fue determinada a 1, 2 y 4 horas de interacción bacteria–célula huésped. Se determinó que la proteína DsbA presenta una función determinante en la capacidad de movilidad y en la invasión bacteriana. En ambas funciones se presenta una función  complementaria de Dlp a DsbA.  Dle tendría una función TDOR específica y limitada, asociada con la biosíntesis de fimbrias SEF y posiblemente de algunas proteínas de virulencia. Dle  no tiene efecto en la movilidad.  La cepa doble mutante 82139 2C carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos genéticos para ser usados como nuevas cepas vacunales de tipo vivas y atenuadas en su virulencia  debido a que los genes mencionados codifican las proteínas TDOR: DsbA, Dlp y Dle, encargadas de inducir el correcto plegamiento y/o transporte de proteínas de virulencia, fimbrias y flagelos para el correspondiente  ensamblaje, translocación y/o inserción de invasinas, adhesinas y flagelinas, respectivamente.

Palabras Clave: Proteínas TDOR DsbA, Dlp y Del, Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139.

Biografia do Autor

Liliana Villanueva, Universidad Nacional de Trujillo

Laboratorio de Microbiología Molecular  Universidad Complutense de Madrid. España

Rafael Rotger

Laboratorio de Microbiología Molecular  Universidad Complutense de Madrid. España

Raúl Beltrán

Laboratorio de Biología Molecular de la Universidad Nacional de Trujillo, Perú

Referências

CALZADA B. (1964). Métodos Estadísticos para la Investigación. 2da. Edic. Edit. SESATOR. Lima. Perú.

DONGXIA L, V. CHRISTOPHER Y J. SLAUCH. (2008). The Salmonella SPI1 Type Three Secretion System Responds to PeriplasmicDisulfide Bond Status via the Flagellar Apparatus and the RcsCDB System. Journal of Bacteriology. Jan 2008. P. 87-97. American Society for Microbiology.

DOUGLAS C. (1991). Diseño y Análisis de Experimentos. 1 Edic. Edit. Iberoaméricana S. A. de C. V. México D.F. México.

GALLANT C., T. PONNAMPALAM, H. SPENCER, J. HINTON Y N. MARTÍN. (2004). H-NS Represses Salmonella enteric SerovarTyphimurium dsbA Expression during Exponential Growth. Journal of Bacteriology. Feb. 2004, p. 910-918. American Society for Microbiology.

HERNÁNDES S, C. FERNÁNDEZ Y L. BAPTISTA. (1999). Metodología de la Investigación. 2da. Edic. Editoral Mc GRAW – HILL.México D.F. México.

JIMÉNEZ S. Y J. JIMÉNEZ M.; (1998). Genética Microbiana. Editorial Síntesis. España.

KEINJI INABA Y KOREAKI ITO, (2008). Structure and mechanisms of the DsbB- DsbA disulfide bond generation machine. ELSEVIER. Biochimica et Biophysica Acta 1783 (2008) 520-529. Koreaki.Ito@ky5.ecs.kyoto-u.ac.jp

MENDOZA DEL CUETO, (2002).Tesis Doctoral: Clonación del gen dsbA de Salmonella typhi y Salmonella enteritidis Y caracterización del fenotipo resultante de su inactivación. Universidad Complutense de Madrid – Facultad de Farmacia – Departamento de Microbiología II: Laboratorio de Microbiología Clínica Molecular . España.

RODRÍGUEZ – PEÑA, J. M., (1996). Tesis Doctoral: Mapa génico del plásmido de virulencia de Salmonella enteritidis y Caracterización de regiones homólogas del cromosoma de Salmonella typhi. Universidad Complutense de Madrid- Facultad de Farmacia. 1996.

RODRÍGUEZ – PEÑA J.; M. BUISÁN, M. IBÁÑEZ Y R. ROTGER. (1997). Genetis map of the virulence of Salmonella enteritidis and nucleotide sequence of its replicons. Gene. 188: 53 – 61.

ROTGER, R.; J. RODRÍGUEZ – PEÑA; M. BUISÁN; M. IBÁÑEZ. (1995). Genética de la virulencia de Salmonella. Microbiología y Genética Molecular. Tomo I : 13 – 27.

SANCHEZ – JIMENEZ, M Y N.M. CARDONA - CASTRO, (2003). Mecanismos de interacción de Salmonella con la mucosa intestinal. Instituto Colombiano de Medicina Tropical – Asociación Colombiana de Infectología. Medellín - Colombia. Vol 7 – 1

TSUYOSHI M, N. OKADA Y D. HIROFUMI. (2004). Two periplasmic Disulfide Oxidoreductases, DsbA and SrgA , Target Outer Membrane Protein SpiA, a Component of the Salmonella Pathogenicity Island 2 Type III Secretion System. The Journal of Biological Chemystry. American Society for Biochemistry and Molecular Biology. May 28. 2004. Vol. 279. N°33.Issue of August 13. Pp. 34631-34642, 2004.Printed in USA.

TORTORA J., F. BURDELL Y CH. CASE, (1993). Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia S.A. Zaragoza – España.

TSUYOSHI M.; N. OKADA; H. DANBARA. (2004). Two periplasmic Disulfide Oxidoreductases, DsbA and SrgA , Target Outer Membrane Protein SpiA, a Component of the Salmonella Pathogenicity Island 2 Type III Secretion System. The Journal of Biological Chemystry. American Society for Biochemistry and Molecular Biology. May 28. 2004. Vol. 279. N°33. Issue of

August 13. Pp. 34631-34642, 2004.Printed in USA.

VILLANUEVA L. Y R. ROTGER,(2003). Tesis Doctoral - DEA: Efectos de la Inactivación y Complementación del gen dle de Salmonella enteritidis. Universidad Complutense de Madrid – Facultad de Farmacia – Departamento de Microbiología II: Laboratorio de Microbiología Clínica Molecular. España.

WATSON J.; T. BAKER; S. BELL; A. GANN; M. LEVINE; R. LOSICK. (2008). Biología Molecular del Gen. 5° Edición. Editorial Médica Panamericana S.A. Madrid -España. pp 776.

Publicado

2013-12-20

Como Citar

Villanueva, L., Rotger, R., & Beltrán, R. (2013). Protocolo celular para ensayos in vitro utilizando cepas atenuadas de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139. Revista CIENCIA Y TECNOLOGÍA, 8(22), 97-110. Recuperado de https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/PGM/article/view/194

Edição

Seção

Artículos Originales