Protocolo molecular para obtener cepas vacunales atenuadas en su virulencia de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139

Resumo

Se presenta el Protocolo Molecular para obtener cepas vivas atenuadas en su virulencia a partir de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139 (S. enteritidis 82139), como modelo de elaboración de una cepa vacunal y la propuesta de modelos de biorreactores con fines de su producción. Se diseñó y seleccionó las cepas mutantes que permiten determinar la función génica de dsbA, dle y dlp en la capacidad de movilidad y de invasión bacteriana intracelular. Se obtuvieron cepas simples mutantes: 82139 C, 82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresión dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Para la obtención y construcción de las cepas mutantes se usaron las técnicas: PCR, Electroforesis, electrolución, secuenciación, clonación, extracción plasmídica, miniprés y maxiprés de vectores monocopia y multicopia, recombinación genética por transformación y transducción, titulación de fagos, construcción de vectores, técnicas de interrupción y complementación génica. La cepa doble mutante 82139 2C, carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos genéticos para ser usados como cepas vacunales debido a que los genes mencionados codifican las proteínas TDOR: DsbA, Dlp y Del, respectivamente. El trabajo establece las bases para proponer un protocolo Celular para ensayos in vitro en la determinación de infecciones bacterianas en líneas celulares y que reemplace a los ensayos in vivo.