Protocolo molecular para obtener cepas vacunales atenuadas en su virulencia de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139

Liliana Villanueva, Rafael Rotger, Raúl Beltrán

Resumen


Se presenta el Protocolo Molecular para obtener cepas vivas atenuadas en su virulencia a partir de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139 (S. enteritidis 82139), como modelo de elaboración de una cepa vacunal y la propuesta de modelos de biorreactores con fines de su producción. Se diseñó y seleccionó las cepas mutantes que permiten determinar la función génica de dsbA, dle y dlp en la capacidad de movilidad y de invasión bacteriana intracelular. Se obtuvieron cepas simples mutantes: 82139 C, 82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresión dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Para la obtención y construcción de las cepas mutantes se usaron las técnicas: PCR, Electroforesis, electrolución, secuenciación, clonación, extracción plasmídica, miniprés y maxiprés de vectores monocopia y multicopia, recombinación genética por transformación y transducción, titulación de fagos, construcción de vectores, técnicas de interrupción y complementación génica. La cepa doble mutante 82139 2C, carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos genéticos para ser usados como cepas vacunales debido a que los genes mencionados codifican las proteínas TDOR: DsbA, Dlp y Del, respectivamente. El trabajo establece las bases para proponer un protocolo Celular para ensayos in vitro en la determinación de infecciones bacterianas en líneas celulares y que reemplace a los ensayos in vivo.

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