Protocolo celular para ensayos in vitro utilizando cepas atenuadas de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139
Resumen
Se propone un protocolo celular para determinar la capacidad de movilidad y de la invasión bacteriana intracelular de cepas vivas atenuadas en su virulencia, construidas a partir de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139 portadora de plásmido (S. enteritidis 82139). Las cepas obtenidas fueron: cepas simples mutantes: 82139 C, 82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI. y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresión de dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Se usó el Diseño Factorial para seleccionar y construir las cepas mutantes así como para determinar la Diferencia Mínima Significativa de la función génica de dsbA, dle y dlp en la movilidad y de capacidad de invasión bacteriana. La prueba de movilidad fue realizada en agar y leídas durante 36 horas. La prueba de invasión bacteriana fue determinada a 1, 2 y 4 horas de interacción bacteria–célula huésped. Se determinó que la proteína DsbA presenta una función determinante en la capacidad de movilidad y en la invasión bacteriana. En ambas funciones se presenta una función complementaria de Dlp a DsbA. Dle tendría una función TDOR específica y limitada, asociada con la biosíntesis de fimbrias SEF y posiblemente de algunas proteínas de virulencia. Dle no tiene efecto en la movilidad. La cepa doble mutante 82139 2C carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos genéticos para ser usados como nuevas cepas vacunales de tipo vivas y atenuadas en su virulencia debido a que los genes mencionados codifican las proteínas TDOR: DsbA, Dlp y Dle, encargadas de inducir el correcto plegamiento y/o transporte de proteínas de virulencia, fimbrias y flagelos para el correspondiente ensamblaje, translocación y/o inserción de invasinas, adhesinas y flagelinas, respectivamente.
Palabras Clave: Proteínas TDOR DsbA, Dlp y Del, Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139.Citas
CALZADA B. (1964). Métodos Estadísticos para la Investigación. 2da. Edic. Edit. SESATOR. Lima. Perú.
DONGXIA L, V. CHRISTOPHER Y J. SLAUCH. (2008). The Salmonella SPI1 Type Three Secretion System Responds to PeriplasmicDisulfide Bond Status via the Flagellar Apparatus and the RcsCDB System. Journal of Bacteriology. Jan 2008. P. 87-97. American Society for Microbiology.
DOUGLAS C. (1991). Diseño y Análisis de Experimentos. 1 Edic. Edit. Iberoaméricana S. A. de C. V. México D.F. México.
GALLANT C., T. PONNAMPALAM, H. SPENCER, J. HINTON Y N. MARTÍN. (2004). H-NS Represses Salmonella enteric SerovarTyphimurium dsbA Expression during Exponential Growth. Journal of Bacteriology. Feb. 2004, p. 910-918. American Society for Microbiology.
HERNÁNDES S, C. FERNÁNDEZ Y L. BAPTISTA. (1999). Metodología de la Investigación. 2da. Edic. Editoral Mc GRAW – HILL.México D.F. México.
JIMÉNEZ S. Y J. JIMÉNEZ M.; (1998). Genética Microbiana. Editorial Síntesis. España.
KEINJI INABA Y KOREAKI ITO, (2008). Structure and mechanisms of the DsbB- DsbA disulfide bond generation machine. ELSEVIER. Biochimica et Biophysica Acta 1783 (2008) 520-529. Koreaki.Ito@ky5.ecs.kyoto-u.ac.jp
MENDOZA DEL CUETO, (2002).Tesis Doctoral: Clonación del gen dsbA de Salmonella typhi y Salmonella enteritidis Y caracterización del fenotipo resultante de su inactivación. Universidad Complutense de Madrid – Facultad de Farmacia – Departamento de Microbiología II: Laboratorio de Microbiología Clínica Molecular . España.
RODRÍGUEZ – PEÑA, J. M., (1996). Tesis Doctoral: Mapa génico del plásmido de virulencia de Salmonella enteritidis y Caracterización de regiones homólogas del cromosoma de Salmonella typhi. Universidad Complutense de Madrid- Facultad de Farmacia. 1996.
RODRÍGUEZ – PEÑA J.; M. BUISÁN, M. IBÁÑEZ Y R. ROTGER. (1997). Genetis map of the virulence of Salmonella enteritidis and nucleotide sequence of its replicons. Gene. 188: 53 – 61.
ROTGER, R.; J. RODRÍGUEZ – PEÑA; M. BUISÁN; M. IBÁÑEZ. (1995). Genética de la virulencia de Salmonella. Microbiología y Genética Molecular. Tomo I : 13 – 27.
SANCHEZ – JIMENEZ, M Y N.M. CARDONA - CASTRO, (2003). Mecanismos de interacción de Salmonella con la mucosa intestinal. Instituto Colombiano de Medicina Tropical – Asociación Colombiana de Infectología. Medellín - Colombia. Vol 7 – 1
TSUYOSHI M, N. OKADA Y D. HIROFUMI. (2004). Two periplasmic Disulfide Oxidoreductases, DsbA and SrgA , Target Outer Membrane Protein SpiA, a Component of the Salmonella Pathogenicity Island 2 Type III Secretion System. The Journal of Biological Chemystry. American Society for Biochemistry and Molecular Biology. May 28. 2004. Vol. 279. N°33.Issue of August 13. Pp. 34631-34642, 2004.Printed in USA.
TORTORA J., F. BURDELL Y CH. CASE, (1993). Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia S.A. Zaragoza – España.
TSUYOSHI M.; N. OKADA; H. DANBARA. (2004). Two periplasmic Disulfide Oxidoreductases, DsbA and SrgA , Target Outer Membrane Protein SpiA, a Component of the Salmonella Pathogenicity Island 2 Type III Secretion System. The Journal of Biological Chemystry. American Society for Biochemistry and Molecular Biology. May 28. 2004. Vol. 279. N°33. Issue of
August 13. Pp. 34631-34642, 2004.Printed in USA.
VILLANUEVA L. Y R. ROTGER,(2003). Tesis Doctoral - DEA: Efectos de la Inactivación y Complementación del gen dle de Salmonella enteritidis. Universidad Complutense de Madrid – Facultad de Farmacia – Departamento de Microbiología II: Laboratorio de Microbiología Clínica Molecular. España.
WATSON J.; T. BAKER; S. BELL; A. GANN; M. LEVINE; R. LOSICK. (2008). Biología Molecular del Gen. 5° Edición. Editorial Médica Panamericana S.A. Madrid -España. pp 776.
Descargas
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Los autores/as que publiquen en esta revista aceptan las siguientes condiciones:
- Los autores/as conservan los derechos de autor y ceden a la revista el derecho de la primera publicación, con el trabajo registrado con la licencia de atribución de Creative Commons, que permite a terceros utilizar lo publicado siempre que mencionen la autoría del trabajo y a la primera publicación en esta revista.
- Los autores/as pueden realizar otros acuerdos contractuales independientes y adicionales para la distribución no exclusiva de la versión del artículo publicado en esta revista (p. ej., incluirlo en un repositorio institucional o publicarlo en un libro) siempre que indiquen claramente que el trabajo se publicó por primera vez en esta revista.
- Se permite y recomienda a los autores/as a publicar su trabajo en Internet (por ejemplo en páginas institucionales o personales) antes y durante el proceso de revisión y publicación, ya que puede conducir a intercambios productivos y a una mayor y más rápida difusión del trabajo publicado
