Actividad de la β-galactosidasa en células de Kluyveromyces sp. permeabilizadas con etanol a diferentes concentraciones, temperaturas y tiempos.

Julio Arellano Barragán, María Quiñaca Rodriguez, Mariana Flores Abad, Cynthia Obeso Villazón

Resumen


En el presente trabajo se realizó la permeabilización de la membrana de Kluyveromyces sp. para determinar la actividad de la β - galactosidasa presente en esta levadura. La permeabilización se llevó a cabo en tubos de ensayo conteniendo la masa celular fresca de Kluyveromyces sp. y agregando diferentes concentraciones de etanol a respectivos tiempos y temperaturas. Las concentraciones de etanol fueron de 30, 50 y 70%; las temperaturas de 20, 40 y 60° C; y los tiempos de 5, 15 y 30 minutos, obteniéndose 27 combinaciones con las cuales se realizó la permeabilización de la membrana de Kluyveromyces sp.. Se centrifugaron los contenidos de cada tubo, colocando el sedimento celular en
placas de vidrio para su desecación en frío y finalmente, las placas fueron dejadas en una campana de vidrio conteniendo cloruro de calcio para completar la desecación. La actividad de β - galactosidasa fue determinada usando una solución de buffer fosfato citrato con pH 6.5 suplementado con lactosa 5%; MgSO4 .7H2O al 0.12%; MnSO4 al 0.02%. La glucosa fue cuantificada por el método de la glucosa oxidasa. Los resultados obtenidos demostraron que el tratamiento de la levaduras desecadas a concentraciones de 30% de alcohol, 20°C y 5 min de exposición presentaron mayor actividad enzimática, con un valor de 2.9642 µmol de glucosa /min. seguida de las combinaciones de 30% de
alcohol, 20°C y 15 min, 30% de alcohol, 20°C y 30 min con valores de 2.863 y 1.4815 µmol de glucosa/min. respectivamente. Las concentraciones de 50 y 70% de alcohol a las diferentes temperaturas y tiempos de exposición ensayados demuestran una nula o casi nula actividad enzimática.
Palabras clave: Kluyveromyces sp, β – galactosidasa, permeabilización,


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