Purificación y estructura primaria de una lectina aislada de semillas de Buddleja coriácea
Resumen
Se purificó una lectina aislada de semillas de Buddleja coriacea R. (“colle negro”, Buddlejaceae) mediante cromatografía de exclusión molecular y cromatografía líquida de alta eficiencia de fase reversa (HPLC). El análisis en SDS-PAGE de dos dimensiones demostró que la lectina purificada
es homogénea porque aparece como un único spot proteico correspondiendo a ~12 kDa con un punto isoeléctrico de 5.3. Mediante espectrometría de masa (MALDI-TOF) se confirmó el peso molecular de la lectina mostrando una masa de 12,630.1405 Da. El análisis de aminoácidos reveló que la lectina de Buddleja coriacea R. (BCL) es de carácter ácido y altamente hidrofóbico (21% de residuos ácidos y 41% de hidrofóbicos). La secuencia completa de aminoácidos señaló que BCL contiene 119 residuos. El estudio comparativo con otras lectinas mostró que BCL tiene alta similaridad con lectinas de Cratylia mollis (Leguminosae, 96,60% de homología) y Cratylia argentea (89,90% de homología). Según el árbol filogenético, BCL presentó una secuencia evolutiva de ~2000 nucleótidos con respecto a la lectina extraída de semillas de Cratylia mollis. BCL exhibió aglutinación de los grupos sanguíneos humanos “A”, “B” y “AB” Rh (+) con una concentración mínima de hemaglutinación de 1,3 µg/mL; la actividad hemaglutinante fue inhibida por la D-lactosa y D-manosa (0,048 y 0,097 mM,
respectivamente) y por los agentes quelantes EDTA (25 mM) y EGTA (25 mM).
Palabras clave: Buddleja coriacea, lectina, BCL, secuencia de aminoácidos, árbol filogenético.
Citas
Ayouba, A.; H., Causse; E., Van Damme; W., Peumans; C., Cambillau and P., Rogé. Interactions of plant lectins with the components of the bacterial cell wall peptidoglycan. Biochem
Syst. Ecol. 1994. 22: 153-159.
Carvalho, D.; S., Marangoni; B., Oliveira; J., Novello. Isolation and characterization of a new lectin from the venom of the snake Bothrops jararacussu. Biochem. Mol. Biol. Inter 1998. 44:933-938.
Castillo-Villanueva, A.; F., Abdullaev. Lectinas vegetales y sus efectos en el cáncer. Rev. Inv. Clín. 2005. 55-64p.
CIED (Centro de Investigación, Educación y Desarrollo). Productos andinos potenciales [en línea]. 2005. Disponible en: http://www.ciedperu. org/productos/fraprod.htm
Cintra, A. A., S. Marangoni, B. Oliveira and J. R. Giglio. Bothropstoxin-I: Amino acid sequence and function. Journal of protein chemistry 1993.12:1
Collinge, D.; K., Kragh; J., Mikkelsen; K., Nielsen; U., Rasmussen y K., Vad. Plant chitinases. Plant J. 1993. 3: 31-40.
De Souza, G.A., Oliveira, P.S., Trapani, S., Santos, A.C., Rosa, J.C., Laure, H.J., Faca, V.M., Correia, M.T., Tavares, G.A., Oliva, G., Coelho, L.C. and Greene, L.J. Amino acid sequence and tertiary structure of Cratylia mollis seed lectin.
Glycobiology. 2003. 13 (12), 961-972.
Freire, M.; O., Machado; M., Smolka; S., Marangoni; J., Novello y M., Macedo. Isolation and characterization of isolectins from Talasia esculenta seeds. J. Protein. Chem. 2001. 20(6): 495-500.
GREEN, J. Especies forestales de alta demanda en la zona rural. Japan Green Resources Agency [en línea]. 2002. Disponible en: http://www.green. go.jp/gyoumu/kaigai/manual/bolivia/01technical_ manual/spanish/attached02.pdf
Henrikson, R. and S., Meredith. Amino acid analysis by reverse-phase high performance liquid chromatography in differentiating mouse astrocytes in primary culture. Dev. Neurosci. 1984. 1:226-237.
Houmard J, and Drapean GR. Staphilococcal protease. A proteotytic enzyme specific for glutamoyl bonds. Proc Nat Acad. Sci USA 1972. 69:3506-3509
Hudak, K.; P., Wang and N., Tumer. A novel
mechanism for inhibition of translation by pokeweed antiviral protein: depurination of the capped RNA template. RNA. 2000. 6:369-380.
Smolka Mb, Zhou H, Purkayastha S, Aebersold R. Optimization of the isotope-coded affinity taglabeling procedure for quantitative proteome analysis. Anal Biochem. 2001. 297:25-31
Sharon, N. and Lis, H. Lectins, 2nd ed. Kluwer Scientific Publishers, Amsterdam. 2003.
Sharon, N. and Lis, H. Encyclopedia Biological Chemistry (in press) Lectins. 2004
Toyama, M.; E., Carneiro; S., Marangoni; M., Amaral; L., Velloso and A., Boschero. Isolation and characterization of a convulxin-like protein from Crotalus durissus collilineatus venom. J. Prot. Chem. 2001. 20(7):585-591.
Wongkham S, Wongkham C, Trisonthi C, Boonsiri
P, Simasathiansophon S, Atisook K. Isolation and properties of a lectin from the seeds of Butea monosperma. Plant Sci 1994. 103:121–126
Young, D.C. and Green II, J.A. Methods for removing biuret from urea by adsorption. United States Union Oil Company of California (Los Angeles, CA) Patent number: 4701555. 1987.
Zhu, K.; R., Shade; H., Koiwa; R., Salzman; M., Narasimhan; R., Bressan; P., Hasegawa and L., Murdock. Carbohydrate binding and resístanse to proteolysis control insecticidal activity of Griffonia simplicifonia lectin II. Plant. Biology. 1998.
:15123-15128.
