Primera identificación molecular del transgen de la proteína fluorescente roja (RFP) en peces Cebra (Danio rerio) transgénicos ornamentales introducidos en el Perú
DOI:
https://doi.org/10.17268/sci.agropecu.2013.03.12Palabras clave:
Fluorescencia, FRP (Proteína Fluorescente Roja), pez Cebra, Transgénico, OVM (Organismo Vivo Modificado), PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)Resumen
En el presente trabajo se identificó por primera vez peces Cebra transgénicos (Danio rerio) fluorescentes de color rojo, naranja y rosado introducidos al territorio peruano de acuarios locales utilizando la técnica de PCR para amplificar el transgen RFP perteneciente a la anémona marina Discosoma spp. Se encontró una expresión génica diferencial del transgen de la proteína fluorescente roja (RFP) que determinaría una gradiente de bioluminiscencia para cada color entre los peces OVM analizados. Se realizó un análisis de secuencias de las dos variantes de la RFP junto con las seis variantes de la GFP de proteínas fluorescentes existentes en el Genbank que podrían ayudar a identificar rápidamente si son nuevos genes o si son nuevas variantes de éstas proteínas fluorescentes y que podrían ser utilizadas en otros OVMs hidrobiológicos a futuro. De este modo, desarrollar y optimizar las medidas de bioseguridad mediante su oportuna detección a nivel genético molecular.Citas
Amsterdam, A.; Lin, S.; Hopkins, N. 1995. The Aequorea Victoria green fluorescent protein can be used as a reporter in live zebrafish embryos. Developmental Biology 171: 123-129.
Bielikova, M.; Bukovska, G.; Vavrova, S.; Timko, J.; Turna, J. 2012. Identification of genetically modified zebrafish (Danio rerio) by PCR methods. Disponible en: http://gmoglobalconference.jrc.ec.europa.eu/ Posters.htm
Chung, O. 2006. Biotechnology: Nightlights for the Aquarium. Taiwan Review April: 40-45.
DNA2.0. 2013. IP-Free™ Fluorescent Proteins. Disponible en: https://www.dna20.com/wp-content/uploads/2013/ 04/Intellectual_Property_Statement.pdf
Genbank. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ genbank/
Gong, Z.; Ju, B.; Wan, H. 2001. Green fluorescent protein (GFP) transgenic fish and their applications. Genetica 111: 213-225.
Gong, Z.; Wan, H.; Leng, Tay.; Wang, H.; Chen, M.; Yan, T. 2003. Development of transgenic fish for ornamental and bioreactor by strong expression of fluorescent proteins in the skeletal muscle. Biochemical and Biophysical Research Communications 308: 58–63.
Hall, T.A. 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symposium Series 41: 95-98.
Jeanmougin, F.; Thompson, J.; Gouy, M.; Higgins, D.; Gibson, T. 1998. Multiple sequence alignment with Clustal X. Trends in Biochemical Science 23:403-405.
Kumar, S.; Nei, M; Dudley, J.; Tamura, K. 2008. MEGA: A biologist-centric software for evolutionay analysis of DNA and protein sequences. Briefings in Bioinformatics 9(4): 299-306.
Ley Nº 27104. Ley de prevención de riesgos derivados del uso de la biotecnología. (1999, mayo 12). Diario Oficial El Peruano, pp. 173055.
Ley Nº 29811. Ley que establece la moratoria al ingreso y producción de organismos vivos modificados al territorio nacional por un período de 10 años. (2011, Noviembre 17). Diario Oficial El Peruano, pp. 454601.
Matz, M.; Fradkov, A.; Laba, Y.; Savitsky, A.; Zaraisky, A.; Markelov, M.; Lukyanov, S. 1999. Fluorescent proteins from nonbioluminescent Anthozoa species. Nature Biotechnology 17: 969-973.
Pan, X.; Zhan, H.; Gong, Z. 2008. Ornamental Expression of Red Fluorescent Protein in Transgenic Founders of White Skirt Tetra (Gymnocorymbus ternetzi). Marine Biotechnology 10: 497–501.
Patterson, G.; Day, R.; Piston, D. 2001. Fluorescent protein spectra. Journal Cell Science Mar 114: 837-838.
Petersen, J.; Wilmann, P.; Beddoe, T.; Oakley, A.; Devenish, R.; Prescott, M.; Rossjohn, J. 2003. The 2.0-A crystal structure of eqFP611, a far red fluorescent protein from the sea anemone Entacmaea quadricolor. The Journal of Biological Chemistry 278: 44626-44631.
Prasher, D.; Eckenrode,V.; Ward, W.; Prendergast, F.; Cormier, M. 1992. Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene 111(2): 229-233.
Rehbein, H.; Bogerd, J. 2007. Identification of Genetically Modified Zebrafish (Danio rerio) by Protein- and DNA-Analysis. Journal fur Verbracherschutz und Lebensmittelsicherheit. 2: 122-125.
Shagin, D.; Barsova, E.; Yanushevich, Y.; Fradkov, A.; Lukyanov, K.; Labas, Y.; Semenova, T.; Ugalde, J.; Meyers, A.; Nunez, J.; Widder, E.; Lukyanov, S.; Mikhail, M. 2004. GFP-like Proteins as Ubiquitous Metazoan Superfamily: Evolution of Functional Features and Structural Complexity. Molecular Biology and Evolution 21 (5): 841-850.
Shaner, N.; Campbell, R.; Steinbach, P.; Giepmans, B.; Palmer, A.; Tsien, R. 2004. Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein. Nature Biotechnology 22: 1567-1572.
Shaner, N.; Steinbach, P.; Tsien, R. 2005. A guide to choosing fluorescent proteins. Nature Methods 2: 905-909.
Scotto, C. 2011. Peces transgénicos fluorescentes en el Perú: Bioseguridad y análisis de riesgos pendientes. The Biologist (Lima) 8: 235-243.
Scotto, C. 2012. Nota Científica: Reproducción e hibridación de peces transgénicos fluorescentes en cautiverio: un alcance prospectivo. Scientia Agropecuaria 3(1): 89-93.
Tanaka, M.; Kinoshita, M.; Kobayashi, D.; Nagahama, Y. 2001. Establishment of medaka (Oryzias latipes) transgenic lines with the expression of green fluorescent protein fluorescence exclusively in germ cells: a useful model to monitor germ cells in a live vertebrate. Proceeding National Academic Science USA 98(5): 2544-2549.
Tsien, R. 1998. The green fluorescent protein (Review). Annual Review of Biochemistry 67: 509-544.
UniProtKB. 2013. Protein knowledge base. Disponible en: http://www.uniprot.org.
Verkhusha, V.; Lukyanov, K. 2004. The molecular properties and applications of Anthozoa fluorescent proteins and chromoproteins. Nature Biotechnology 22:289-296.
Wall, M.; Socolich, M.; Ranganathan, R. 2000. Nature Structural Biology 7(12): 1133-1138.
Wan, H.; He, J.; Ju, B.; Yan, T.; Lam, T.; Gong, Z. 2002. Generation of Two-color Transgenic Zebrafish Using the Green and Red Fluorescent Protein Reporter Genes GFP and RFP. Marine Biotechnology 4: 146–154.
Wiedenmann, J.; Schenk, A.; Roecker, C.; Girod A.; Spindler, K.-D.; Nienhaus, G. 2002. A far-red fluorescent protein with fast maturation and reduced oligomerization tendency from Entacmaea quadricolor (Anthozoa, Actinaria). Proceeding National Academy Science U.S.A. 99(18): 11646-11651.
Zeng Z.; Liu, X.; Seebah, S.; Gong, Z. 2005. Faithful expression of living color reporter genes in transgenic medaka under two tissue-specific zebrafish promoters. Developmental Dynamics 234: 387–392.
Received: 06/08/13
Accepted: 07/09/13
Corresponding author: E-mail: carlosscotto@yahoo.com (C. Scotto)
Descargas
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Los autores que publican en esta revista aceptan los siguientes términos:
a. Los autores conservan los derechos de autor y conceden a la revista el derecho publicación, simultáneamente licenciada bajo una licencia de Creative Commons que permite a otros compartir el trabajo, pero citando la publicación inicial en esta revista.
b. Los autores pueden celebrar acuerdos contractuales adicionales separados para la distribución no exclusiva de la versión publicada de la obra de la revista (por ejemplo, publicarla en un repositorio institucional o publicarla en un libro), pero citando la publicación inicial en esta revista.
c. Se permite y anima a los autores a publicar su trabajo en línea (por ejemplo, en repositorios institucionales o en su sitio web) antes y durante el proceso de presentación, ya que puede conducir a intercambios productivos, así como una mayor citación del trabajo publicado (ver efecto del acceso abierto).