Antígenos del líquido seudocelómico de Ascaris suum detectados por Western Blot utilizando IgY producidos en Gallus gallus var. Hisex Brown
Resumen
La técnica de Western blot está siendo cada vez más usada en el diagnóstico de enfermedades parasitarias y la búsqueda de fuentes antigénicas para su aplicación constituye un campo de interés creciente. El presente trabajo estuvo orientado a identificar los antígenos en líquido seudocelómico (LS) de Ascaris suum, mediante la técnica de Western Blot utilizando IgY producidos en Gallus gallus. El LS se obtuvo de ejemplares hembras que fueron extraídas directamente del intestino de cerdos naturalmente infectados y sacrificados en el Camal Municipal de El Porvenir (Trujillo, Perú), el cual se utilizó para inmunizar, junto con el adyuvante completo e incompleto de Freud, a un ejemplar de G. gallus Hisex Brown, a fin de obtener IgY contenida en la yema de huevo. En el LS tratado con dithiothreithol (DTT) se encontró 12 bandas antigénicas, cuyos pesos moleculares fueron: 101.0, 94.9, 65.0, 61.1, 50.6, 45.0, 41.5, 34.6, 22.4, 16.3, 14.4 y 12.7-10.5 KDa; mientras que en el LS no tratado con DTT se encontraron 15 bandas antigénicas, cuyos pesos moleculares fueron: 101.0, 94.9, 65.0, 61.1, 50.6, 45.0, 41.9, 34.6, 27.0, 25.4, 21.5, 18.5, 16.3, 14.4 y 11.2 KDa. Se concluye que el LS de Ascaris suum es una buena fuente de proteínas antigénicas que podrían utilizarse en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar.
Palabras clave: Ascaris suum, líquido seudocelómico, Western blot.
Citas
Pullan RL, Brooker SJ. The global limits and populations at risk of soil-transmitted helminth infections in 2010. Parasites & Vectors 2012; 5: 81
Walker M, Hall A, Basáurez M-G. Individual predisposition, household clustering and risk factors for human infection with Ascaris lumbricoides: new epidemiological insights. PLoS Negl Troop Dis,2012; 5(4): e1047
Cooper PJ. Interactions between helminth parasites and allergy. Curr Opin Allergy Immunol, 2011; 9(1): 29-37
Scott ME. Ascaris lumbricoides: Una revisión de su epidemiologia y su relación con otras infecciones. Ann Nestle, 2008; 66: 7-22.
Machiacado RJ, Marcos RL, Canales M, Terashima A, et al. Prevalencia de parasitosis intestinal en el Perú (2000-2010). Re peru parasitol, 2010; 18(Supl): s13
Sánchez J. Etiología y epidemiologia de la ascariosis porcina. Mundo ganadero. 2002; 145: 42-48.
Boes J, Medley GF, Eriksen L, Roepstorff A, Nansen P. Distribution of Ascaris suum in experimentally and naturally infected pigs and comparison with Ascaris lumbricoides infections in humans. Parasitology 1998; 117: 589-596.
Roepstorff A. Natural Ascaris suum infections in swine diagnosed by coprological and serological (ELISA) methods. Parasitol Res. 1998; 84(7): 537-543.
Pérez ME, Gonzales AJ. Relación de Neumonía y Parasitosis de ciclo pulmonar en niños de 1 a 12 años en el Hospital Central “Antonio María Pineda” Barquisimeto-Venezuela. Bol Med Postgrado. 1994; 10(3): 192-195.
Alparo I, Tamayo L. Síndrome de Loeffler: Presentación de un caso. Cuad Hosp Clin. 2005; 50(2): 69-73.
Inatomi Y, Murakami T, Tokunaga M, Ishiwata K, Nawa Y, Uchino M. Encephalopathy caused by visceral larva migrans due to Ascaris suum. J Neurol Sci. 1999; 164(2): 195-199.
Ramírez L. Antígenos de excreción/secreción de Ascaris lumbricoides var sum detectados por Western Blot usando suero de Oryctolagus cuniculus “conejo” inmunizado experimentalmente. [Tesis Biólogo-Microbiólogo]. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Perú. 2002.
Escalante H, Liñán R, Díaz E, Davelois K, Huamanhay O. Antígenos de larvas pulmonares de Ascaris suum reconocidos por anticuerpos producidos en Oryctolagus cuniculus. Parasitol Latinoam. 2005; 60(3-4): 132-137.
Leiva D, Colina JC, Escalante H, Jara CA. Antígenos de líquido seudocelómico de Ascaris suum detectados por la técnica de Western Blot utilizando IgG producida en Oryctolagus cuniculus inmunizado experimentalmente. REBIOL 2012; 32(1): 49-57
Pauly D, Chacana PA, Calzado EG, Brembs B, Schade R. IgY Technology: extraction of chicken antibodies from egg yolk by polythyleneglicol (PEG) precipitation. J Vis Exp. 2011; (51): 235-254.
Cabrera JA, Castillo EE, Colina JC, Guzmán JA, Jara CA. Antígenos de fluido vesicular de Cysticercus tenuicollis detectados mediante la técnica de Western blot utilizando anticuerpos IgY e IgG. REBIOL. 2009; 29(1).
Bradford M. A rapid sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Anal Biochem. 1976; 72: 248-254.
Escalante H, Davelois K, Torres P. Antígenos específicos de Taenia solium detectados por Western Blot usando suero de paciente con parasitosis confirmada. SCIENDO. 1999; 2 (1-2): 33-39.
Montes RC, Murcia C, Zarco L. Producción de anticuerpos antiprogesterona a partir de la yema de huevo de gallinas y del suero sanguíneo de conejos, para ser utilizados en radioinmunoanálisis. Vet Mex. 1994; 25(2): 117-125.
Colina J, Leiva D, Escalante H, Jara CA. Antígenos del líquido seudocelómico de Toxocara canis identificados mediante la técnica de Electroinmunotransferencia utilizando anticuerpos producidos en Oryctolagus cuniculus. REBIOL. 2011; 31(2).
Chávez F, Vásquez O, Escalante H. Evaluación de la técnica de Western Blot para la detección de antígenos de Hymenolepis nana. Rev Peru Biol. 2007; 14(2): 283-286.
De la Fuente A, Rodríguez J, Fonseca E. Análisis de proteínas mediante electroforesis e inmunotransferencia (Western Blot). Piel. 2007; 22(5): 252-258.
Escalante H, Davelois K, Ortiz P, Rodríguez H, Díaz E, Jara CA. Estandarización de la técnica de Western blot para el diagnóstico de la fasciolosis humana utililzando antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepática. Rev Peru Med Exp Salud Prublica, 2011; 28(3): 454-461
Frontera E, Serrano FJ, Carrón A, Mora JA, Pérez JE, Reina D. Caracterización antigénica de Ascaris suum mediante SDS-PAGE y Western blotting. Invest Agr: Prod Sanid Anim. 2001; 16(1): 153-163.
Ortega E, Cespon C, Bootello A, Moneo I, Gonzales P. Aislamiento y caracterización de antígenos principales de Anisakis simplex. Alergol Inmunol Clin. 2000; 15: 262-266.
Nunes CM, Tundisi RN, Garcia JF, Heinemann MB, Ogassawara S, Richtzenhain LJ. Cross-reactions between Toxocara canis and Ascaris suum in the diagnosis of visceral larva migrans by Western blotting technique. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 1997; 39(5): 253-256.
Espinoza Y, Huapaya P, Suarez R, Chávez V, Sevilla C, Dávila E et al. Estandarización de la técnica de ELISA para el diagnóstico de Toxocariasis humana. Anales de la Facultad de Medicina. 2003; 64(1): 7-12.