Eficacia de la Técnica de Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay con antígenos de Excreción-Secreción de Tripomastigotes de Trypanosoma cruzi para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas
Resumen
Se estima que aproximadamente 10 millones de personas están infectadas por Trypanosoma cruzi, agente productor de la enfermedad de Chagas en América Latina y más de 15 millones de personas están a riesgo de adquirirla. El presente trabajo tuvo como finalidad determinar la eficacia de la Técnica de Elisa con la utilización de antígenos de excreción-secreción de tripomastigotes de T. cruzi (TESA) en la detección de anticuerpos específicos. Los tripomastigotas se obtuvieron a partir de epimastigotes de una cepa proveniente Arequipa (Perú), a la cual se le incrementó su biomasa en medio bifásico hasta obtener 1x108 parásitos/mL durante 15 días, luego fueron cultivados en medio Grace y en Medio de Eagle (Minimun Essential Medium) para la obtención de los TESA. Estos fueron enfrentados con sueros controles para determinar la eficacia de un ELISA-indirecto. Se encontró que la sensibilidad fue del 100% y la especificidad del 95%. Se concluye que la Técnica de ELISA puede ser utilizada a gran escala, por la facilidad de evaluar un número elevado de muestras y obtener resultados automatizados que no dependen de la subjetividad del personal para su interpretación.
Palabras clave: Enfermedad de Chagas, ELISA, trpomastigotas, Trypanosoma cruzi
Citas
Schmunis GA. Epidemiology of Chagas disease in non-endemic countries: the role of international migration. Rev Inst Med Trop, 2007; 102: 75-85.
Carod-Artal FJ, Gaseon J. Chagas disease and stroke. Lancet Neurol, 2010; 9: 533-542
Kowalski A, Kowalski P, Torres TMA. Chagas disease-American tripanosomiasis. Pol Ann Med, 2011; 18(1): 156-167
Teixeira ARL, Hecht MM, Guimaro MC, Sousa AO, et al. Pathogenesis of Chagas disease: parasite persistence and immunity. Clin Microbiol Rev, 2011; 24(3): 592-630
Machado FS, Dutra WO, Esper L, Gollob KJ, et al. Current understanding to Trypanosoma cruzi infection and pathogenesis of Chagas disease. Sem Immunopathol, 2012; 34: 753-770
Bayer AM, Hunter GC, Gilman RH, Cornejo del Carpio JG; et al. Chagas disease, migration and community settlement patterns in Arequipa, Peru. PLoS Negl Trop Dis, 2009; 3(12): e567
Hunter GC, Barroni-Mayorí K, Juarez JA, Neyra RC, et al. A field trial of alternative target screening strategies for Chagas disease in Arequipa, Peru. PLoS Negl Trop Dis, 2012; 6(1): e1468
Chiarpenello J. Enfermedad de Chagas (Tripanosomiasis Americana). Evid Actual Pract Ambul. 2004; 7: 114-9
Berrizbeitia M, Ndao M, Bubis J, Gottschalk M, et al. Purified excreted-secreted antigens from Trypanosoma cruzi trypomastigotes as tool from diagnosis of Chagas disease. J Clin Microbiol, 2006; 44(2): 291-296
Berrizbeitia M, Aguilera G, Ward B, Rodríguez J, Jorquera E, Ndao M. Seroprevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi en la población rural de Miraflores, estado Monagas. Estabilidad y diferencia de reactividad de epimastigotes fijados. Rev Soc Ven Microbiol, 2010; 30(1): 1-5.
Nakasawa M, Rosa DS, Pereira VRA, Moura MO, et al. Excretory-secretory antigens of Trypanosoma cruzi are potentially useful for serodiagnosis of chronic Chagas disease. Clin Diagn Lab Immunol, 2001; 8/5): 1024-1027
Caballero ZC, Sousa OE, Marques WP, Saez-Alquezar A, Umezawa ES. Evaluation of serological tests to identify Trypanosoma cruzi infection in humans and determine crossreactivity with Trypanosoma rangeli and Leishmania spp. Clin Vacc Immunol, 2007; 14(8): 1045-1049.
Zicker F, Smith PG, Luquetti AO, Oliveira OS. Detección de infectados por Trypanosoma cruzi mediante inmunofluorescencia, ELISA y hemaglutinación en suero y eluidos de sangre seca. Bol Of Sanit Panam 1991; 110: 489-496.
Brasil PE, De Castro L, Hasslocher-Moreno AM, Sangernis LHC, Braga JV. ELISA vs PCR from diagnosis of chronic Chagas disease: systematic review and meta-analysis. BMC Infec Dis, 2012; 10: 337
Berrizbeitia M, Figueroa M, Ward BJ, Rodriguez J, et al. Developmenrt and application of an ELISA assay using excretory/secretory proteins from epimastigote forms of Trypanosoma cruzi (ESEA antigens) for the diagnsosi of Chagas disease J Trop Med, 2012; 2012: 875909
Santos LS, Torres RM, Machacado de Asis GF, Bahia MT, et al. In house ELISA method analyzes anti-Trypanosoma cruzi reactivity for differential diagnosis and evaluation of Chagas disease morbidity. Rev Soc Bras Med Trop, 2012; 45(1): 35-44
Figueredo-Silva J, Kaneda Y, Tachibana H, Furushima R, Tateno S, Correia-Lima FG, et al. Epidemiological survey of Trypanosoma cruzi infection in north-eastern Brazil using different diagnostic methods. Rev Med Inst Trop São Paulo, 1991; 33:193-198.
Gazzinelli RT, Galvao LM, Cardoso JE, Cancado JR, Kretti AU, Brener Z, et al. Anti-Trypanosoma cruzi and anti-laminin antibodies in chagasic patients after specific treatment. J Clin Microbiol 1988; 26: 1795-1800.
Eagle H. myo-Inositol as an Essential Growth Factor for Normal and Malignant Human Cells in Tissue Culture. J Biol Chem, 1956; 214: 845-847
Vega S, Náquira C. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de la Trypanomiosis americana (Enfermedad de Chagas). 2da ed. Lima: Instituto Nacional de Salud; 2006.
Bradford, MM (1976), Método rápido y sensible para la cuantificación de cantidades de microgramos de proteína utilizando el principio de la proteína de unión a colorante. 72 :248-254, doi : 10.1016/0003-2697(76) 90527-3.
Afonso AM, Ebell MH, Tarleton RL. A systematic review of high quality diagnsosi test fro Chagas disease. PLoS Negl Trop Dis, 2012; 6(11): e1881.