Purificación y estructura primaria de una lectina aislada de semillas de Buddleja coriácea

Autores/as

  • Werne Mendoza Blanco Universidad Nacional de San Agustín, Arequipa-Perú
  • Luis Ponce Soto Universidad de Campinas, Brasil

Resumen

Se purificó una lectina aislada de semillas de Buddleja coriacea R. (“colle negro”, Buddlejaceae) mediante cromatografía de exclusión molecular y cromatografía líquida de alta eficiencia de fase reversa (HPLC). El análisis en SDS-PAGE de dos dimensiones demostró que la lectina purificada
es homogénea porque aparece como un único spot proteico correspondiendo a ~12 kDa con un punto isoeléctrico de 5.3. Mediante espectrometría de masa (MALDI-TOF) se confirmó el peso molecular de la lectina mostrando una masa de 12,630.1405 Da. El análisis de aminoácidos reveló que la lectina de Buddleja coriacea R. (BCL) es de carácter ácido y altamente hidrofóbico (21% de residuos ácidos y 41% de hidrofóbicos). La secuencia completa de aminoácidos señaló que BCL contiene 119 residuos. El estudio comparativo con otras lectinas mostró que BCL tiene alta similaridad con lectinas de Cratylia mollis (Leguminosae, 96,60% de homología) y Cratylia argentea (89,90% de homología). Según el árbol filogenético, BCL presentó una secuencia evolutiva de ~2000 nucleótidos con respecto a la lectina extraída de semillas de Cratylia mollis. BCL exhibió aglutinación de los grupos sanguíneos humanos “A”, “B” y “AB” Rh (+) con una concentración mínima de hemaglutinación de 1,3 µg/mL; la actividad hemaglutinante fue inhibida por la D-lactosa y D-manosa (0,048 y 0,097 mM,
respectivamente) y por los agentes quelantes EDTA (25 mM) y EGTA (25 mM).
Palabras clave: Buddleja coriacea, lectina, BCL, secuencia de aminoácidos, árbol filogenético.

Biografía del autor/a

Werne Mendoza Blanco, Universidad Nacional de San Agustín, Arequipa-Perú

Escuela de Postgrado de la Universidad Nacional de San Agustín, Arequipa

Luis Ponce Soto, Universidad de Campinas, Brasil

Departamento de Bioquímica, Instituto de Biología

Citas

Ayouba, A.; H., Causse; E., Van Damme; W., Peumans; C., Cambillau and P., Rogé. Interactions of plant lectins with the components of the bacterial cell wall peptidoglycan. Biochem

Syst. Ecol. 1994. 22: 153-159.

Carvalho, D.; S., Marangoni; B., Oliveira; J., Novello. Isolation and characterization of a new lectin from the venom of the snake Bothrops jararacussu. Biochem. Mol. Biol. Inter 1998. 44:933-938.

Castillo-Villanueva, A.; F., Abdullaev. Lectinas vegetales y sus efectos en el cáncer. Rev. Inv. Clín. 2005. 55-64p.

CIED (Centro de Investigación, Educación y Desarrollo). Productos andinos potenciales [en línea]. 2005. Disponible en: http://www.ciedperu. org/productos/fraprod.htm

Cintra, A. A., S. Marangoni, B. Oliveira and J. R. Giglio. Bothropstoxin-I: Amino acid sequence and function. Journal of protein chemistry 1993.12:1

Collinge, D.; K., Kragh; J., Mikkelsen; K., Nielsen; U., Rasmussen y K., Vad. Plant chitinases. Plant J. 1993. 3: 31-40.

De Souza, G.A., Oliveira, P.S., Trapani, S., Santos, A.C., Rosa, J.C., Laure, H.J., Faca, V.M., Correia, M.T., Tavares, G.A., Oliva, G., Coelho, L.C. and Greene, L.J. Amino acid sequence and tertiary structure of Cratylia mollis seed lectin.

Glycobiology. 2003. 13 (12), 961-972.

Freire, M.; O., Machado; M., Smolka; S., Marangoni; J., Novello y M., Macedo. Isolation and characterization of isolectins from Talasia esculenta seeds. J. Protein. Chem. 2001. 20(6): 495-500.

GREEN, J. Especies forestales de alta demanda en la zona rural. Japan Green Resources Agency [en línea]. 2002. Disponible en: http://www.green. go.jp/gyoumu/kaigai/manual/bolivia/01technical_ manual/spanish/attached02.pdf

Henrikson, R. and S., Meredith. Amino acid analysis by reverse-phase high performance liquid chromatography in differentiating mouse astrocytes in primary culture. Dev. Neurosci. 1984. 1:226-237.

Houmard J, and Drapean GR. Staphilococcal protease. A proteotytic enzyme specific for glutamoyl bonds. Proc Nat Acad. Sci USA 1972. 69:3506-3509

Hudak, K.; P., Wang and N., Tumer. A novel

mechanism for inhibition of translation by pokeweed antiviral protein: depurination of the capped RNA template. RNA. 2000. 6:369-380.

Smolka Mb, Zhou H, Purkayastha S, Aebersold R. Optimization of the isotope-coded affinity taglabeling procedure for quantitative proteome analysis. Anal Biochem. 2001. 297:25-31

Sharon, N. and Lis, H. Lectins, 2nd ed. Kluwer Scientific Publishers, Amsterdam. 2003.

Sharon, N. and Lis, H. Encyclopedia Biological Chemistry (in press) Lectins. 2004

Toyama, M.; E., Carneiro; S., Marangoni; M., Amaral; L., Velloso and A., Boschero. Isolation and characterization of a convulxin-like protein from Crotalus durissus collilineatus venom. J. Prot. Chem. 2001. 20(7):585-591.

Wongkham S, Wongkham C, Trisonthi C, Boonsiri

P, Simasathiansophon S, Atisook K. Isolation and properties of a lectin from the seeds of Butea monosperma. Plant Sci 1994. 103:121–126

Young, D.C. and Green II, J.A. Methods for removing biuret from urea by adsorption. United States Union Oil Company of California (Los Angeles, CA) Patent number: 4701555. 1987.

Zhu, K.; R., Shade; H., Koiwa; R., Salzman; M., Narasimhan; R., Bressan; P., Hasegawa and L., Murdock. Carbohydrate binding and resístanse to proteolysis control insecticidal activity of Griffonia simplicifonia lectin II. Plant. Biology. 1998.

:15123-15128.

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Publicado

2014-01-08

Cómo citar

Blanco, W. M., & Soto, L. P. (2014). Purificación y estructura primaria de una lectina aislada de semillas de Buddleja coriácea. SCIÉNDO, 15(1). Recuperado a partir de https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/SCIENDO/article/view/459

Número

Sección

Artículos Originales